多糖的分子量与分子量分布测定法
英文名：
书页号：E6-附录3
多糖的分子量与分子量分布是用高效液相色谱法（中国药典1995年版二部附录ⅤＤ）测定。
1.对仪器的一般要求 所用仪器为高效液相色谱仪。色谱柱为测多糖专用凝胶柱，根据所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱。检测器为示差折光检测器单用，有时亦可与紫外检测器联用。
2.系统适用性试验 按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在该分析状态下的分配系数(Kd)应达到规定的要求。
(1)n=5.54(t/W)
(2)K=t－t0/tT－t0
式中W为半峰宽；
t为供试品峰的保留时间，用于测柱效时，指葡萄糖峰的保留时间；
t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保留时间；
tT为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。
3.测定法 (1)系统校正 根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品（常用的为葡聚糖dextran），分别用流动相溶解制成每1ml中约含10mg的溶液，分别注入25μl标准品溶液，记录示差色谱图。由GPC专用软件绘制标准曲线。线性回归方程为：
logM＝a＋bRT式中 M为标样的已知重均分子量； RT为标样的保留时间。
(2)样品测量注入25μl供试品溶液，记录示差色谱图，分子量计算如下：
Mn＝ΣRI/Σ(RI/M
Mw＝Σ(RIM)/ΣRI
D＝Mw/Mn式中 Mn为数均分子量；
RIi为样品i级分的物质量，即示差色谱图的峰高；
Mi为样品i级分的分子量，即示差色谱图I时间点代入标准曲线获得的分子量。
4.结果处理 采用GPC专用软件，可获得样品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图,各时间点的分子量(片断数据)和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。
